電泳介質(zhì)的pH值 溶液的pH值決定帶電物質(zhì)的解離程度,也決定物質(zhì)所帶凈電荷的多少.對(duì)蛋白質(zhì),氨基酸等類似兩性電解質(zhì),pH值離等電點(diǎn)越遠(yuǎn),粒子所帶電荷越多,泳動(dòng)速度越快,反之越慢。因此,當(dāng)分離某一種混合物時(shí),應(yīng)選擇一種能擴(kuò)大各種蛋白質(zhì)所帶電荷量差別的pH值,以利于各種蛋白質(zhì)的有效分離.為了保證電泳過(guò)程中溶液的pH值恒定,必須采用緩沖溶液。
電泳基本原理:生物大分子如蛋白質(zhì),核酸,多糖等大多都有陽(yáng)離子和陰離子基團(tuán),稱為兩性離子。常以顆粒分散在溶液中,它們的靜電荷取決于介質(zhì)的H+濃度或與其他大分子的相互作用。在電場(chǎng)中,帶電顆粒向陰極或陽(yáng)極遷移,遷移的方向取決于它們帶電的符號(hào),這種遷移現(xiàn)象即所謂電泳。
等速電泳 是在樣品中加有離子(其遷移率比所有被分離離子的大)和終末離子(其遷移率比所有被分離離子的?。?,樣品加在離子和終末離子之間,在外電場(chǎng)作用下,各離子進(jìn)行移動(dòng),經(jīng)過(guò)一段時(shí)間電泳后,達(dá)到完全分離。被分離的各離子的區(qū)帶按遷移率大小依序排列在離子與終末離子的區(qū)帶之間。由于沒(méi)有加入適當(dāng)?shù)闹С蛛娊赓|(zhì)來(lái)載帶電流,所得到的區(qū)帶是相互連接的(圖d),且因“自身校正”效應(yīng),界面是清晰的,這是與區(qū)帶電泳不同之處。
在確定的條件下,帶電粒子在單位電場(chǎng)強(qiáng)度作用下,單位時(shí)間內(nèi)移動(dòng)的距離(即遷移率)為常數(shù),是該帶電粒子的物化特征性常數(shù)。不同帶電粒子因所帶電荷不同,或雖所帶電荷相同但荷質(zhì)比不同,在同一電場(chǎng)中電泳,經(jīng)一定時(shí)間后,由于移動(dòng)距離不同而相互分離。分開(kāi)的距離與外加電場(chǎng)的電壓與電泳時(shí)間成正比。