在電場(chǎng)中液體對(duì)于一個(gè)固體的固定相相對(duì)移動(dòng)稱為電滲.在有載體的電泳中,影響電泳移動(dòng)的一個(gè)重要因素是電滲。常遇到的情況是γ-球蛋白,由原點(diǎn)向負(fù)極移動(dòng),這就是電滲作用所引起的倒移現(xiàn)象.產(chǎn)生電滲現(xiàn)象的原因是載體中常含有可電離的基團(tuán),如濾紙中含有羥基而帶負(fù)電荷,與濾紙相接觸的水溶液帶正電荷,液體便向負(fù)極移動(dòng)。由于電滲現(xiàn)象往往與電泳同時(shí)存在,所以帶電粒子的移動(dòng)距離也受電滲影響;如電泳方向與電滲相反,則實(shí)際電泳的距離等于電泳距離加上電滲的距離.瓊脂中含有瓊脂果膠,,其中含有較多的硫酸根,所以在瓊脂電泳時(shí)電滲現(xiàn)象很明顯,許多球蛋白均向負(fù)極移動(dòng)。除去了瓊脂果膠后的瓊脂糖用作凝膠電泳時(shí),電滲大為減弱.電滲所造成的移動(dòng)距離可用不帶電的有色染料或有色葡聚糖點(diǎn)在支持物的中心,以觀察電滲的方向和距離。
電場(chǎng)強(qiáng)度(電勢(shì)梯度Electric field intensity)是指每厘米的電位降(電位差或電位梯度).電場(chǎng)強(qiáng)度對(duì)電泳速度起著正比作用,電場(chǎng)強(qiáng)度越高,帶電顆粒移動(dòng)速度越快。根據(jù)實(shí)驗(yàn)的需要,電泳可分為兩種:一種是高壓電泳,所用電壓在500~1000V或更高.由于電壓高,電泳時(shí)間短(有的樣品需數(shù)分鐘),適用于低分子化合物的分離,如氨基酸,無(wú)機(jī)離子,包括部分聚焦電泳分離及序列電泳的分離等。因電壓高,產(chǎn)熱量大,必須裝有冷卻裝置,否則熱量可引起蛋白質(zhì)等物質(zhì)的變性而不能分離,還因發(fā)熱引起緩沖液中水分蒸發(fā)過(guò)多,使支持物(濾紙,薄膜或凝膠等)上離子強(qiáng)度增加,以及引起虹吸現(xiàn)象(電泳槽內(nèi)液被吸到支持物上)等,都會(huì)影響物質(zhì)的分離.另一種為常壓電泳,產(chǎn)熱量小,室溫在10~25℃分離蛋白質(zhì)標(biāo)本是不被破壞的,無(wú)需冷卻裝置,一般分離時(shí)間長(zhǎng)。
電泳基本原理:生物大分子如蛋白質(zhì),核酸,多糖等大多都有陽(yáng)離子和陰離子基團(tuán),稱為兩性離子。常以顆粒分散在溶液中,它們的靜電荷取決于介質(zhì)的H+濃度或與其他大分子的相互作用。在電場(chǎng)中,帶電顆粒向陰極或陽(yáng)極遷移,遷移的方向取決于它們帶電的符號(hào),這種遷移現(xiàn)象即所謂電泳。
根據(jù)電泳涂裝的質(zhì)量要求,構(gòu)成其表面處理工序的主要有五個(gè)。脫脂除銹-水洗-表調(diào)-磷化-水洗。脫脂除銹是表面處理工藝中為重要的一道工序,不僅是因?yàn)樵摴ば虻奶幚沓杀臼钦麄€(gè)表面處理工藝中的工序,對(duì)整個(gè)涂裝成本的影響可謂舉足輕重,據(jù)有關(guān)用戶計(jì)算,脫脂除銹工序的處理成本約占整個(gè)表面處理成本1/2~1/3,占涂裝總成本1/6~1/4,同時(shí),還由于脫脂除銹工序的處理質(zhì)量得到了保證,后面幾道工序的處理質(zhì)量就比較容易獲得保證。