電泳是指帶電顆粒在電場(chǎng)的作用下發(fā)生遷移的過(guò)程。許多重要的生物分子,如氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、核苷酸、核酸等都具有可電離基團(tuán),它們?cè)谀硞€(gè)特定的pH值下可以帶正電或負(fù)電,在電場(chǎng)的作用下,這些帶電分子會(huì)向著與其所帶電荷極性相反的電極方向移動(dòng)。
指示劑前沿呈現(xiàn)兩邊向上或向下的現(xiàn)象。向上的“微笑”現(xiàn)象說(shuō)明凝膠的不均勻冷卻,中間部分冷卻不好,所以導(dǎo)致凝膠中分子有不同的遷移率所致。這種情況在用較厚的凝膠以及垂直電泳中時(shí)常發(fā)生。向下的“皺眉”現(xiàn)象常常是由于垂直電泳時(shí)電泳槽的裝置不合適引起的,特別是當(dāng)凝膠和玻璃板組成的“三明治”底部有氣泡或靠近隔片的凝膠聚合不完全便會(huì)產(chǎn)生這種現(xiàn)象。
蛋白帶偏斜常常是由于濾紙條或電極放置不平行所引起的,或由于加樣位置偏斜而引起。
蛋白帶過(guò)寬,與鄰近蛋白泳道的蛋白帶相連,這是由于加樣量太多或加樣孔泄漏引起的。
蛋白帶模糊不清和分辨不佳是由于多種原因引起的。雖然梯度凝膠可以提高分辨率,但與其他方法相比,常規(guī)聚丙烯酰胺凝膠電泳是分辨率較低的方法。為了提高分辨率,不要加過(guò)多的樣品,小體積樣品可給出窄帶。加樣后應(yīng)立即電泳,以防止擴(kuò)散。