電泳技術(shù)就是利用在電場(chǎng)的作用下,由于待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)以及分子本身大小、形狀等性質(zhì)的差異,使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度,從而對(duì)樣品進(jìn)行分離、鑒定或提純的技術(shù)。
電泳過程必須在一種支持介質(zhì)中進(jìn)行。Tiselius等在1937年進(jìn)行的自由界面電泳沒有固定支持介質(zhì),所以擴(kuò)散和對(duì)流都比較強(qiáng),影響分離效果。于是出現(xiàn)了固定支持介質(zhì)的電泳,樣品在固定的介質(zhì)中進(jìn)行電泳過程,減少了擴(kuò)散和對(duì)流等干擾作用。
電泳裝置主要包括兩個(gè)部分:電源和電泳槽。電源提供直流電,在電泳槽中產(chǎn)生電場(chǎng),驅(qū)動(dòng)帶電分子的遷移。電泳槽可以分為水平式和垂直式兩類。垂直板式電泳是較為常見的一種,常用于聚丙烯酰胺凝膠電泳中蛋白質(zhì)的分離。
“拖尾”現(xiàn)象是電泳中常見的現(xiàn)象。這常常是由于樣品溶解不佳引起的,克服的辦法是在加樣前離心,選用合適的樣品緩沖液和凝膠緩沖液,加增溶輔助試劑。另一方法是降低凝膠濃度。
“紋理”現(xiàn)象常常是由于樣品中不溶顆粒引起的,克服辦法是增加溶解度和離心除去不溶性顆粒。
選擇合適的凝膠濃度,使組分得以充分的分離。通??拷把氐牡鞍讕Х直媛什患?,所以應(yīng)根據(jù)分子量與凝膠孔徑的關(guān)系,灌制足夠長(zhǎng)度的凝膠,以使樣品不會(huì)走出前沿。樣品的蛋白水解作用也引起擴(kuò)散而使分辨率降低。水解作用通常發(fā)生在樣品準(zhǔn)備的時(shí)候,系統(tǒng)中的內(nèi)源性蛋白酶會(huì)水解樣品蛋白,如果在緩沖液中加蛋白酶抑制劑可以減少這種情況的發(fā)生。