電泳是指帶電顆粒在電場的作用下發(fā)生遷移的過程。許多重要的生物分子,如氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、核苷酸、核酸等都具有可電離基團(tuán),它們?cè)谀硞€(gè)特定的pH值下可以帶正電或負(fù)電,在電場的作用下,這些帶電分子會(huì)向著與其所帶電荷極性相反的電極方向移動(dòng)。
電泳裝置主要包括兩個(gè)部分:電源和電泳槽。電源提供直流電,在電泳槽中產(chǎn)生電場,驅(qū)動(dòng)帶電分子的遷移。電泳槽可以分為水平式和垂直式兩類。垂直板式電泳是較為常見的一種,常用于聚丙烯酰胺凝膠電泳中蛋白質(zhì)的分離。
SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳可測定蛋白質(zhì)分子量.其原理是帶大量電荷的SDS結(jié)合到蛋白質(zhì)分子上克服了蛋白質(zhì)分子原有電荷的影響而得到恒定的荷/質(zhì)比。SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳測蛋白質(zhì)分子量已經(jīng)比較成功,此法測定時(shí)間短,分辨率高,所需樣品量極少(1~100μg),但只適用于球形或基本上呈球形的蛋白質(zhì),某些蛋白質(zhì)不易與SDS結(jié)合如木瓜蛋白酶,核糖核酸酶等,此時(shí)測定結(jié)果就不準(zhǔn)確.
蛋白帶模糊不清和分辨不佳是由于多種原因引起的。雖然梯度凝膠可以提高分辨率,但與其他方法相比,常規(guī)聚丙烯酰胺凝膠電泳是分辨率較低的方法。為了提高分辨率,不要加過多的樣品,小體積樣品可給出窄帶。加樣后應(yīng)立即電泳,以防止擴(kuò)散。