初的支持介質(zhì)是濾紙和醋酸纖維素膜,目前這些介質(zhì)在實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)應(yīng)用得較少。在很長(zhǎng)一段時(shí)間里,小分子物質(zhì)如氨基酸、多肽、糖等通常用濾紙或纖維素、硅膠薄層平板為介質(zhì)的電泳進(jìn)行分離、分析,但目前則一般使用更靈敏的技術(shù)如HPLC等來(lái)進(jìn)行分析。這些介質(zhì)適合于分離小分子物質(zhì),操作簡(jiǎn)單、方便。但對(duì)于復(fù)雜的生物大分子則分離效果較差。
凝膠作為支持介質(zhì)的引入大大促進(jìn)了電泳技術(shù)的發(fā)展,使電泳技術(shù)成為分析蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子的重要手段之一。初使用的凝膠是淀粉凝膠,但目前使用得多的是瓊脂糖凝膠和聚丙烯酰胺凝膠。蛋白質(zhì)電泳主要使用聚丙烯酰胺凝膠。
選擇合適的凝膠濃度,使組分得以充分的分離。通常靠近前沿的蛋白帶分辨率不佳,所以應(yīng)根據(jù)分子量與凝膠孔徑的關(guān)系,灌制足夠長(zhǎng)度的凝膠,以使樣品不會(huì)走出前沿。樣品的蛋白水解作用也引起擴(kuò)散而使分辨率降低。水解作用通常發(fā)生在樣品準(zhǔn)備的時(shí)候,系統(tǒng)中的內(nèi)源性蛋白酶會(huì)水解樣品蛋白,如果在緩沖液中加蛋白酶抑制劑可以減少這種情況的發(fā)生。
電泳
膠體溶液中的陽(yáng)極和陰極接通電源后,膠體粒子在電場(chǎng)的作用下,帶正或(帶負(fù))電荷的膠體粒子向陰極(或陽(yáng)極)一方泳動(dòng)的現(xiàn)象稱(chēng)為電泳。膠體溶液中的物質(zhì)不是分子和離子的狀態(tài),而是分散在液體中的溶質(zhì),該物質(zhì)較大(10-7 ~10~9m),不會(huì)沉淀而成分散狀態(tài)。