制膠時(shí)在凝膠溶液中放一個(gè)塑料梳子,在膠聚合后移去,形成上樣品的凹槽。水平式電泳,凝膠鋪在水平的玻璃或塑料板上,用一薄層濕濾紙連接凝膠和電泳緩沖液,或?qū)⒛z直接浸入緩沖液中。由于pH值的改變會(huì)引起帶電分子電荷的改變,進(jìn)而影響其電泳遷移的速度,所以電泳過程應(yīng)在適當(dāng)?shù)木彌_液中進(jìn)行的,緩沖液可以保持待分離物的帶電性質(zhì)的穩(wěn)定。
初的支持介質(zhì)是濾紙和醋酸纖維素膜,目前這些介質(zhì)在實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)應(yīng)用得較少。在很長(zhǎng)一段時(shí)間里,小分子物質(zhì)如氨基酸、多肽、糖等通常用濾紙或纖維素、硅膠薄層平板為介質(zhì)的電泳進(jìn)行分離、分析,但目前則一般使用更靈敏的技術(shù)如HPLC等來進(jìn)行分析。這些介質(zhì)適合于分離小分子物質(zhì),操作簡(jiǎn)單、方便。但對(duì)于復(fù)雜的生物大分子則分離效果較差。
電泳技術(shù)就是利用在電場(chǎng)的作用下,由于待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)以及分子本身大小、形狀等性質(zhì)的差異,使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度,從而對(duì)樣品進(jìn)行分離、鑒定或提純的技術(shù)。 電泳過程必須在一種支持介質(zhì)中進(jìn)行。Tiselius等在1937年進(jìn)行的自由界面電泳沒有固定支持介質(zhì),所以擴(kuò)散和對(duì)流都比較強(qiáng),影響分離效果。于是出現(xiàn)了固定支持介質(zhì)的電泳,樣品在固定的介質(zhì)中進(jìn)行電泳過程,減少了擴(kuò)散和對(duì)流等干擾作用。
操作注意事項(xiàng)
1.連接的氣壓不應(yīng)大于145psi。
2.拆卸膠槍前,需先將氣壓管分離。
3.要操作順利,每次施工后,應(yīng)用密封膠生產(chǎn)商建議的溶劑抹去槍管內(nèi)剩余密封膠。(不允許將膠槍浸泡在溶劑中)
4.施工時(shí),槍管前端蓋塞應(yīng)經(jīng)常緊閉。
5.施工完,請(qǐng)輕放膠槍,小心損傷前蓋和后端消聲器。
6.勿將槍口對(duì)準(zhǔn)人。
7. 在連續(xù)工作過程中,膠槍每次停止工作時(shí)間一般不得超過5分鐘,否則,應(yīng)打膠到膠排出完為止。
8.高壓膠管不得強(qiáng)行擠壓、彎曲,防止影響膠槍正常工作。