蛋白帶模糊不清和分辨不佳是由于多種原因引起的。雖然梯度凝膠可以提高分辨率,但與其他方法相比,常規(guī)聚丙烯酰胺凝膠電泳是分辨率較低的方法。為了提高分辨率,不要加過多的樣品,小體積樣品可給出窄帶。加樣后應(yīng)立即電泳,以防止擴(kuò)散。
指示劑前沿呈現(xiàn)兩邊向上或向下的現(xiàn)象。向上的“微笑”現(xiàn)象說明凝膠的不均勻冷卻,中間部分冷卻不好,所以導(dǎo)致凝膠中分子有不同的遷移率所致。這種情況在用較厚的凝膠以及垂直電泳中時常發(fā)生。向下的“皺眉”現(xiàn)象常常是由于垂直電泳時電泳槽的裝置不合適引起的,特別是當(dāng)凝膠和玻璃板組成的“三明治”底部有氣泡或靠近隔片的凝膠聚合不完全便會產(chǎn)生這種現(xiàn)象。
電泳槽中間是夾在一起的兩塊玻璃板,玻璃板兩邊由塑料條隔開,在玻璃平板中間制備電泳凝膠,凝膠的大小通常是12cm ′ 14 cm,厚度為1mm~2 mm,近年來新研制的電泳槽,膠面更小、更薄,以節(jié)省試劑和縮短電泳時間。
電泳裝置主要包括兩個部分:電源和電泳槽。電源提供直流電,在電泳槽中產(chǎn)生電場,驅(qū)動帶電分子的遷移。電泳槽可以分為水平式和垂直式兩類。垂直板式電泳是較為常見的一種,常用于聚丙烯酰胺凝膠電泳中蛋白質(zhì)的分離。