選擇合適的凝膠濃度,使組分得以充分的分離。通常靠近前沿的蛋白帶分辨率不佳,所以應根據(jù)分子量與凝膠孔徑的關(guān)系,灌制足夠長度的凝膠,以使樣品不會走出前沿。樣品的蛋白水解作用也引起擴散而使分辨率降低。水解作用通常發(fā)生在樣品準備的時候,系統(tǒng)中的內(nèi)源性蛋白酶會水解樣品蛋白,如果在緩沖液中加蛋白酶抑制劑可以減少這種情況的發(fā)生。
初的支持介質(zhì)是濾紙和醋酸纖維素膜,目前這些介質(zhì)在實驗室已經(jīng)應用得較少。在很長一段時間里,小分子物質(zhì)如氨基酸、多肽、糖等通常用濾紙或纖維素、硅膠薄層平板為介質(zhì)的電泳進行分離、分析,但目前則一般使用更靈敏的技術(shù)如HPLC等來進行分析。這些介質(zhì)適合于分離小分子物質(zhì),操作簡單、方便。但對于復雜的生物大分子則分離效果較差。
電泳技術(shù)就是利用在電場的作用下,由于待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)以及分子本身大小、形狀等性質(zhì)的差異,使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度,從而對樣品進行分離、鑒定或提純的技術(shù)。 電泳過程必須在一種支持介質(zhì)中進行。Tiselius等在1937年進行的自由界面電泳沒有固定支持介質(zhì),所以擴散和對流都比較強,影響分離效果。于是出現(xiàn)了固定支持介質(zhì)的電泳,樣品在固定的介質(zhì)中進行電泳過程,減少了擴散和對流等干擾作用。
操作注意事項
1.連接的氣壓不應大于145psi。
2.拆卸膠槍前,需先將氣壓管分離。
3.要操作順利,每次施工后,應用密封膠生產(chǎn)商建議的溶劑抹去槍管內(nèi)剩余密封膠。(不允許將膠槍浸泡在溶劑中)
4.施工時,槍管前端蓋塞應經(jīng)常緊閉。
5.施工完,請輕放膠槍,小心損傷前蓋和后端消聲器。
6.勿將槍口對準人。
7. 在連續(xù)工作過程中,膠槍每次停止工作時間一般不得超過5分鐘,否則,應打膠到膠排出完為止。
8.高壓膠管不得強行擠壓、彎曲,防止影響膠槍正常工作。