選擇合適的凝膠濃度,使組分得以充分的分離。通常靠近前沿的蛋白帶分辨率不佳,所以應(yīng)根據(jù)分子量與凝膠孔徑的關(guān)系,灌制足夠長度的凝膠,以使樣品不會走出前沿。樣品的蛋白水解作用也引起擴散而使分辨率降低。水解作用通常發(fā)生在樣品準(zhǔn)備的時候,系統(tǒng)中的內(nèi)源性蛋白酶會水解樣品蛋白,如果在緩沖液中加蛋白酶抑制劑可以減少這種情況的發(fā)生。
SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳可測定蛋白質(zhì)分子量.其原理是帶大量電荷的SDS結(jié)合到蛋白質(zhì)分子上克服了蛋白質(zhì)分子原有電荷的影響而得到恒定的荷/質(zhì)比。SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳測蛋白質(zhì)分子量已經(jīng)比較成功,此法測定時間短,分辨率高,所需樣品量極少(1~100μg),但只適用于球形或基本上呈球形的蛋白質(zhì),某些蛋白質(zhì)不易與SDS結(jié)合如木瓜蛋白酶,核糖核酸酶等,此時測定結(jié)果就不準(zhǔn)確.
聚丙烯酰胺凝膠電泳可用做蛋白質(zhì)純度的鑒定.聚丙烯酰胺凝膠電泳同時具有電荷效應(yīng)和分子篩效應(yīng),可以將分子大小相同而帶不同數(shù)量電荷的物質(zhì)分離開,并且還可以將帶相同數(shù)量電荷而分子大小不同的物質(zhì)分離開。其分辨率遠遠高于一般層析方法和電泳方法,可以檢出10-9~10-12g的樣品,且重復(fù)性好,沒有電滲作用.
操作注意事項
1.連接的氣壓不應(yīng)大于145psi。
2.拆卸膠槍前,需先將氣壓管分離。
3.要操作順利,每次施工后,應(yīng)用密封膠生產(chǎn)商建議的溶劑抹去槍管內(nèi)剩余密封膠。(不允許將膠槍浸泡在溶劑中)
4.施工時,槍管前端蓋塞應(yīng)經(jīng)常緊閉。
5.施工完,請輕放膠槍,小心損傷前蓋和后端消聲器。
6.勿將槍口對準(zhǔn)人。
7. 在連續(xù)工作過程中,膠槍每次停止工作時間一般不得超過5分鐘,否則,應(yīng)打膠到膠排出完為止。
8.高壓膠管不得強行擠壓、彎曲,防止影響膠槍正常工作。